U ovom drugom nastavku sage "Luda noć u muzeju", Lari se suočava sa bitkom toliko velike epske snage da može da se odvija samo u hodnicima najvećeg muzeja na svetu. Sada Lari mora da pokuša da spasi svoje nekad nepokretne prijatelje od onoga što bi moglo da bude njihovo poslednje uporište u Smitsonijanu, gde sve od čuvenih slika na zidu do svemirskih brodova u dvoranama, odjednom postaje živo. U prvom filmu koji je ikad snimljen u kompleksu Smitsonijan, zabava počinje kada Lari napusti loše plaćeni svet čuvara muzeja da bi postao traženi pronalazač Dejli Divajsez telešop proizvoda. Na izgled ima sve ali nešto mu nedostaje u životu, nešto što ga vraća njegovim korenima, Muzeju prirodne istorije, gde je jednom doživeo magičnu noć. Tamo će otkriti nešto uznemirujuće. Njegovi omiljeni eksponati i neki od njegovih najboljih prijatelja, proglašeni su zastarelim. Spakovani u kovčege, čekaju prevoz do ogromne arhive Smitsonijana. Njihova sudbina je nepoznata to jest, sve dok Lari ne dobije uznemirujući poziv od minijaturnog kauboja Džededaje (Oven Vilson), koji ga obaveštava o očekivanoj katastrofi. Izgleda da su novopridošlice probudile svoje nove iskopine, uključujući i egipatskog vladara, Kahmunraha (Henk Azarija) koji je poprilično loše raspoložen posle dremeža od 3.000 godina. Sada, on i trio najodvratnijih zlotvora - Ivan Grozni (Kristofer Gestl), Napoleon Bonaparta (Alan Šabat) i Al Kapone (Džon Berntal) - kuju zaveru da preotmu kontrolu nad muzejom (i čitavim svetom), oslobađajući Armiju podzemlja. Žureći da što pre stigne do prestonice, Lari se uvalio preko glave. Ali ima i impresivne nove prijatelje - od briljantnog Alberta Ajnštajna, do časnog Abrahama Linkolna i do jednog eksponata koji bukvalno oduzima dah - nezadržive Amelije Erhart (Ejmi Adams) koja podstiče Larija da ponovo otkrije svoj nestali osećaj za zabavu i avanturu. Zajedno sa svojim starim prijateljima, uključujući i Teodora Ruzvelta (Robin Vilijams), Oktavijusa (Stiv Kugan), Sakačaeva (Mizuo Pek), Atilu Hunskog (Patrik Galager) i neandertalce - Lari neće stati dok ne spasi svoje prijatelje i ne povrati red u muzeju, od Linkoln memorijala do Svemirskog muzeja - pre nego što svane. "Luda noć u muzeju: 2" predstavlja prvi film koji je ikada snimljen u muzejskom kompleksu Smitsonijana, najvećeg i najposećenijeg muzeja na svetu.